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1. 金鱼(Carassius auratus)咽部寄生洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)的分子鉴定和系统发育分析
郭睿 张善霹 江小斌 王伟 王洪城 蔡雷鸣 杨小强
渔业研究    2021, 43 (1): 61-66.   DOI: 10.14012/j.cnki.fisc.2021.01.007
摘要156)      PDF (3658KB)(536)    收藏
在福州地区开展金鱼病害监测调查中,发现一种寄生于金鱼(Carassius auratus)咽部的粘孢子虫。为了明确虫株,本文以该粘孢子虫为研究对象,使用18S rDNA和ITS-5.8S基因对其进行分子鉴定及系统发育树的构建和分析。结果表明,虫株形态与洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)相似,18S rDNA基因测序结果与已报道的洪湖碘泡虫对应基因序列相似性为98.08%,使用洪湖碘泡虫特异性检测引物可扩增该碘泡虫ITS-5.8S基因片段,结合虫株寄生部位、形态和2个基因的系统发育树分析,可鉴定本文碘泡虫为洪湖碘泡虫。本研究首次发现洪湖碘泡虫除了会危害异育银鲫[C. auratus gibelio (Bloch)]外,还可寄生于金鱼咽部,丰富了对洪湖碘泡虫寄主和寄生部位的认识,对该碘泡虫病害的早期诊断具有一定的参考价值。
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2. 抗原钥孔戚血蓝蛋白(KLH)对金鱼(Carassius auratus)体液免疫的影响研究
郭睿 杨小强 江小斌 王洪城 陈秀霞 方冬兰 龚晖
   2017, 39 (3): 165-171.  
摘要130)      PDF (849KB)(523)    收藏
以钥孔戚血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)为抗原、Montanide ISA 763 A为佐剂开展金鱼免疫试验,检测血清抗体水平,评估金鱼体液免疫应答情况,以期为其免疫策略的制定提供依据。试验在水温15~18℃时进行,(20±3)g体重的健康鱼150 尾,随机均分为三组,第一组使用(KLH+Montanide ISA 763 A)免疫,第二组仅使用KLH免疫,第三组注射等量的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered solution,PBS)为对照,历经三次免疫并对4次采样的血清样本进行ELISA检测。结果显示,第一组和第二组均检测到较高的抗KLH抗体水平,在第二次、第三次免疫后,添加ISA佐剂的第一组抗体仍维持较高水平,而在仅用KLH免疫的第二组抗体水平下降,并降低到对照组水平,表明使用(KLH+Montanide ISA 763 A)免疫金鱼可以获得更加持久和稳定的免疫效果,而仅注射KLH的免疫效果较为短暂。研究还说明金鱼在低温情况下,可以产生良好的体液免疫应答。
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3. 福州地区大黄鱼变形假单胞菌的分离与鉴定
刘年锋 郭睿 江小斌 张善霹 王伟 郑晨晖 杨小强
   2016, 38 (1): 14-20.  
摘要125)      PDF (1472KB)(723)    收藏
为研究2013年春夏之际罗源湾海区网箱养殖大黄鱼(Pseudosciaena crocea)内脏出现白点症状的病原,从具有临床症状的大黄鱼内脏中分离到优势菌,经回接感染试验证实该菌为病原菌;分析该病原菌的形态特征、理化特性、分类地位及药物敏感性等特性,结合16S rDNA序列构建的进化树与假单胞菌属恶臭群中的变形假单胞菌同源性最高,在99%以上,并通过看家基因gyrB序列分析进一步验证该菌为变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida);该菌对强力霉素、诺氟沙星、恩诺沙星3种抗生素敏感,对奥氟沙星、左氟沙星、四环素3种抗生素中度敏感。
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4. 6株鱼源嗜水气单胞菌的分子鉴定与毒力基因分析检测
郭睿 刘年锋 江小斌 张善霹 王伟 郑晨晖 杨小强
   2014, 36 (2): 87-95.  
摘要146)      PDF (5268KB)(1123)    收藏
为了分子鉴定6株鱼源嗜水气单胞菌,并从分子层面验证通过检测毒力基因以推测嗜水气单胞菌潜在致病性的可行性。实验采用PCR扩增16S rDNA和gyrB基因并结合系统发育树的构建和分析进行菌种的分子鉴定,检测气溶素(aerolysin,aer)、溶血素(haemolysin,hly)、丝氨酸蛋白酶(serine protease,ahp)、热稳定细胞肠毒素(heat-stable cytotonic enterotoxin,ast)和热敏感细胞肠毒素(heat-labile cytotonic enterotoxin,alt)5种毒力基因,且使用Mega 5.2对核苷酸和氨基酸序列进行分析。经分子鉴定结果显示6株菌均为嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila,检测出5种毒力基因中的至少4种,其中均检测出溶血素和2种肠毒素,序列分析表明气溶素、溶血素和丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列高度保守。本研究基于16S rDNA和gyrB基因可以准确地对嗜水气单胞菌进行分子鉴定,6株菌的毒力基因丰富预示着一定的致病性,aer、hly和ahp基因相对保守,编码的毒力因子高度同源,在临床分子诊断中建议使用aer、ahp和hly基因对嗜水气单胞菌的潜在致病性进行检测。
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